Экстракция в аналитической биохимии и при выделении ксенобиотиков

8. Выделение ДНК из крови с помощью смолы Chelex

Основная процедура выделения включает в себя очистку от металлосодержащих соединений и протеинов с последующим кипячением образца в присутствии Chelex 100, затем супернатант непосредственно добавляют в ПЦР смесь. 

1. В центрифужную пробирку на 2 мл вносят 1 мл стерильной дистиллированной воды и добавляют 5 мкл крови или 3 мм2 материала с засохшей кровью. Тщательно перемешивают. 

2. Инкубируют при тщательном перемешивании 20 мин при комнатной температуре (лучше всего использовать ротатор для центрифужных пробирок). 

3. Центрифугируют при 10 000 g 3 мин и удаляют супернатант, оставляя (чтобы не взмутить осадок клеток или ткань) 20-30 мкл. 

4. Добавляют 5% раствор Chelex-100 до конечного объема 200 мкл (Chelex в натриевой форме, 5% раствор в стерильной дистиллированной воде). Перед добавлением смолу перемешивают до гомогенного состояния пипеткой с широким отверстием. 

5. Инкубируют при 56 ºС 30 мин и встряхивают в течение 10 сек. 

6. Кипятят образец 8 мин при 95 ºС, встряхивают в течение 10 сек. и центрифугируют при 10 000 g 3 мин. 

7. Для ПЦР берут из полученного супернатанта 20 мкл