Практическая работа количественное определение мочевой кислоты
Опыт № 1: Количественное определение мочевой кислоты в сыворотке крови.
Принцип метода. Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации мочевой кислоты в анализируемом образце.
Воспроизводимость: коэффициент вариации – не более 5%.
Техника выполнения.
|
Реагенты |
Контроль |
Калибровочная проба |
Опыт |
|
Образец (сыворотка) |
— |
— |
2 мл |
|
Калибровочный раствор мочевой кислоты |
— |
2 мл |
— |
|
Вода дистиллированная |
2 мл |
— |
— |
|
Раствор карбоната натрия |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
|
Фосфорновольфрамовый реактив |
0,5 мл |
0,5 мл |
0,5 мл |
Содержимое пробирок тщательно перемешать, инкубировать при комнатной температуре (+18–25° С) в течение 30 минут, после чего измерить величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной пробы при 640 нм (590–700 нм, красный светофильтр) в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Окраска устойчива в течение 30 минут.
Расчет: С = Аоп/Ак × 30 × 10,
где 30 мкмоль – содержание мочевой кислоты в калибровочном растворе, 10 – пересчет на разбавление сыворотки.
В норме содержание мочевой кислоты: мужчины – 240–500 мкМ женщины – 160–400 мкМ