Практическая работа.

Опыт № 1: Количественное определение мочевины в сыворотке крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА

В кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа мочевина образует с диацетилмонооксимом комплексное соединение красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации мочевины в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 510 (490–540) нм.

Воспроизводимость: коэффициент вариации результатов определений – не более 7%.

Техника выполнения.

Реагенты

Контроль

Калибровочная проба

Опыт

1.Вода дистиллированная

0,1 мл

──

──

2.Сыворотка

──

──

0,1 мл

3.Эталонный раствор

──

0,1 мл

──

4.Рабочий реактив

2 мл

2 мл

2 мл

 

Содержимое пробирок тщательно перемешать, пробирки закрыть колпачками из алюминиевой фольги и поместить точно на 10 минут в кипящую водяную баню. Затем пробирки быстро охладить в потоке холодной воды и измерить величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной пробы при длине волны 510 (490–540) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см. Окраска устойчива в течение 15 минут после охлаждения проб.

Формула для расчета: С = Аоп.к´16,65 (моль/л),

где:     С – концентрация мочевины в опытной пробе, г/л;

                        Аоп – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.;   

                        Ак – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.;

                16,65 – концентрация мочевины в калибровочном растворе, ммоль/л.

   

Норма содержания мочевины в крови: 2,5-8,3 ммоль/л. Уровень мочевины в крови характеризует выделительную функцию почек.

Опыт № 2: Качественное определение фенилпирувата в моче.

Принцип метода. Фенилпируват образует с Fе3+ комплексное соединение, окрашенное в сине-зеленый цвет.

Техника выполнения. К 2 мл свежеотфильтрованной мочи приливают 1-2 капли 10% раствора FeCl3. При наличии фенилпирувата через 30-60 секунд разливается сине-зеленая окраска, которая постепенно бледнеет.

 


Last modified: Monday, 16 January 2017, 12:49 PM